Độ pH của tinh dịch ảnh hưởng đến tính di động và khả năng của tinh trùng

Độ pH của tinh dịch ảnh hưởng đến tính di động và khả năng của tinh trùng

Độ pH của tinh dịch ảnh hưởng đến tính di động và khả năng của tinh trùng

MUA TRẢ GÓP

Độ pH của tinh dịch ảnh hưởng đến tính di động và khả năng của tinh trùng

Nguồn tiếng anh: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4501804/

Theo thống kê được báo cáo, khoảng một trong sáu cặp vợ chồng bị vô sinh, trong đó gần một nửa thuộc tính của các yếu tố nam [ 1 ]. Các biểu hiện lâm sàng chính của vô sinh nam bao gồm giảm số lượng tinh trùng (oligozoospermia), giảm khả năng vận động của tinh trùng (asthenospermia) và bất thường về hình thái tinh trùng (teratozoospermia) [ 2 , 3 ]. Hơn 85% nam giới vô sinh thực sự có thể sản xuất tinh trùng [ 4 ], nhưng tinh trùng của họ thường không thể thụ tinh với trứng.

Tinh trùng là tế bào người duy nhất thực hiện chức năng của nó bên ngoài cơ thể nam giới. Môi trường vi mô của tinh trùng, tinh dịch, có ý nghĩa rất lớn. Huyết tương tinh dịch là một hỗn hợp của dịch tiết từ tinh hoàn, mào tinh hoàn và các tuyến tình dục phụ kiện. Huyết tương tinh dịch chứa HCO 3 - / CO 2 , các ion vô cơ, axit hữu cơ, đường, lipit, steroid, axit amin, polyamines, bazơ nitơ và protein [ 5]. Do đó, tinh dịch có khả năng đệm rất cao, cao hơn so với hầu hết các chất lỏng cơ thể khác. Do đó, độ pH của dịch tinh dịch có thể đóng một vai trò quan trọng không chỉ trong việc duy trì khả năng sống và chất lượng của tinh trùng, mà còn trong việc đảm bảo thụ tinh. Ảnh hưởng của pH đến sự di chuyển của tinh trùng ở chim, cá và động vật có vỏ đã được nghiên cứu. Ví dụ, tỷ lệ tinh trùng di động và tốc độ tinh trùng được tăng lên ở pH kiềm ở Thổ Nhĩ Kỳ và chim cút [ 6 ]. Kết quả tương tự cũng thu được ở gà nhà ( Gallus gallus ), và kiềm hóa độ pH của tinh trùng phục hồi bên ngoài ở 40 ° C [ 7 , 8 ]. Hoàng và cộng sự. (2001) báo cáo rằng tinh trùng của Anodonta woodiana Pacifica Houdethể hiện sự vận động mạnh mẽ hơn ở pH 8,5, giảm đáng kể ở pH 7,0, 7,5, 9,5 và 10,0 [ 9 ]. Liu và cộng sự (2010) đã báo cáo rằng tinh trùng của Crossochetlius hemispinus có khả năng thích nghi yếu với các giá trị pH khác nhau, chỉ có thể di chuyển thích hợp trong dung dịch pH 6,5 .57,5 [ 10 ]. Tuy nhiên, các nghiên cứu về pH tinh dịch của con người thường tập trung vào các trường hợp lâm sàng. Nó đã được báo cáo rằng pH tinh dịch thấp hơn 7,2 ở những bệnh nhân mắc bệnh oligospermia hoặc / và asthenospermia [ 11 ]. Một nghiên cứu khác phân chia đoàn hệ của nó thành khả năng vận động và giảm sinh tinh trùng bình thường của nam giới cho thấy không có sự khác biệt đáng kể về pH huyết tương giữa hai nhóm [ 12]. Dựa trên những báo cáo này, chúng tôi đã sử dụng tinh trùng của các nhà tài trợ khỏe mạnh và khám phá ảnh hưởng của độ pH khác nhau đến khả năng vận động và khả năng sống của tinh trùng người.

Na + / K + -ATPase, còn được gọi là bơm Na, là một enzyme trên màng huyết tương chịu trách nhiệm trao đổi ba Na + tế bào chất cho hai K + ngoại bào sử dụng năng lượng từ quá trình thủy phân ATP [ 13 , 14 ]. Na + / K + -ATPase bao gồm hai polypeptide chính là tiểu đơn vị α và [[ 15]. Tiểu đơn vị α có bốn đồng phân α1 Nhảy4 và α1 và 4 hav1. Xin lưu ý rằng phông chữ Biểu tượng trên các trang 4, 7, 8, 9 và 13 không thể là kiểu chữ và sẽ không hiển thị chính xác trong bản thảo đã xuất bản. Thay vào đó, bạn phải sử dụng chức năng Chèn Chèn> Biểu tượng cho một loại phông chữ khác. Vui lòng xóa tất cả phông chữ Biểu tượng khỏi bản thảo của bạn. Bạn có thể xác định các phiên bản của phông chữ Biểu tượng bằng cách sử dụng chức năng Tìm Tìm trong trong Word và tìm kiếm Định dạng của >> Định dạng> Biểu tượng. Để thay thế chính xác biểu tượng, hãy chuyển đến "Chèn> Biểu tượng", chọn phông chữ dựa trên văn bản như "Times New Roman" hoặc "Bình thường" và chọn biểu tượng thích hợp, đảm bảo rằng phông chữ (kiểu chữ) không còn là Biểu tượng. e đã được xác định trong tinh hoàn và tinh trùng [ 16 , 17]. Các α4isoform duy trì sự vận động của các giao tử đực chủ yếu bằng cách kiểm soát độ dốc Na + xuyên màng trong tinh trùng, và ức chế sự suy giảm khả năng vận động của tinh trùng. Hơn nữa, α4isoform có thể kết hợp chức năng với bộ trao đổi Na + / H + (NHE) để điều chỉnh pH nội bào trong tinh trùng, ảnh hưởng đến chức năng của cả tinh trùng không xương sống và động vật có xương sống, chẳng hạn như sự vận động hoặc khởi động của phản ứng acrosome [ 18 - 20 ]. Sự gia tăng rõ rệt về độ pH bên trong đã được chứng minh là kích thích heo rừng [ 21 ] và thịt gà [ 22] vận động tinh trùng. Trong nghiên cứu này, chúng tôi cố gắng khám phá tác động của việc thay đổi pH của tinh dịch, liệu nó có gây ra sự thay đổi khả năng vận động của tinh trùng và pH nội bào hay không và liệu sự thay đổi này có liên quan đến chức năng bơm Na hay không. Ngoài ra, hoạt động Na + / K + -ATPase cũng cần thiết để duy trì nồng độ Ca 2+ nội bào [ 23 ]. Các thông số chính của chức năng tinh trùng, chẳng hạn như sự di chuyển của Flagella, tốc độ bơi, khả năng của tinh trùng và phản ứng acrosome, bị ảnh hưởng bởi dòng Ca 2+ và khả năng di chuyển của tinh trùng phụ thuộc vào nồng độ Ca 2+ tự do nội bào , dẫn đến sự siêu hoạt động của tinh trùng. . Munire và cộng sự . [ 24] báo cáo rằng sự di chuyển của tinh trùng yếu và siêu hoạt động có thể liên quan đến vô sinh; biên độ của dịch chuyển đầu bên (ALH) trong tinh trùng người có mối tương quan tích cực với sự gia tăng của dòng Ca 2+ .

Một số báo cáo trường hợp lâm sàng chỉ ra rằng pH tinh dịch của nam giới asthenospermia có thể đã thay đổi [ 11 , 25 ]. Tuy nhiên, liệu pH và tinh dịch có ảnh hưởng đến sự di chuyển và khả năng của tinh trùng hay không vẫn chưa rõ ràng. Hiểu được ảnh hưởng của pH huyết tương tinh dịch có thể hữu ích cho điều trị vô sinh lâm sàng. Do đó, chúng tôi đã nghiên cứu những thay đổi về khả năng vận động và khả năng sống của tinh trùng trong phạm vi pH liên quan đến sinh học và đo hoạt tính Na + / K + -ATPase tương ứng và thay đổi Ca 2+ của tinh trùng.

Nguyên liệu và phương pháp

Bộ sưu tập tinh trùng

Nghiên cứu này đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức của Bệnh viện Jinling Nam Kinh và theo hướng dẫn của Quốc gia và Quốc tế. Tổng cộng có 136 tình nguyện viên nam tham gia vào nghiên cứu này, với tuổi trung bình là 27,54 ± 3,98 (trung bình ± độ lệch chuẩn). Trước khi bắt đầu nghiên cứu, đã có sự đồng ý bằng văn bản từ tất cả những người tham gia. Tinh trùng được phân tích là từ các tình nguyện viên nam khỏe mạnh. Những người đàn ông này đã chứng minh khả năng sinh sản và chất lượng tinh dịch bình thường, theo tiêu chí của Tổ chức Y tế Thế giới (2010). Các mẫu tinh dịch được lấy bằng thủ dâm sau ít nhất 3 ngày kiêng.

Các mẫu được xuất tinh vào các thùng chứa vô trùng và được hóa lỏng trong ít nhất 30 phút trước khi được xử lý bằng cách ly tâm trong gradient Percoll 60% (GECare, Waukesha, WI, USA) để loại bỏ huyết tương tinh trùng, tế bào mầm chưa trưởng thành và không tinh trùng các tế bào (chủ yếu là tế bào biểu mô), như được mô tả bởi Loredana-Gandini et al. [ 26 , 27 ]. Các tinh trùng được tinh chế sau đó được rửa trong dung dịch dinh dưỡng tinh trùng (NaCl 670,8 mg; KCl 35,6 mg; 147 mg / mL CaCl 2 · 2H 2 O 171 L; KH 2 PO 4 16.3mg; MgSO 4 · 7H 2 O 29.3 mg; NaHCO 4210,6 mg; D-glucose 100 mg; 60% Na · Lactat 0,37 mL; HEPES 238 mg; Penicllin 6 mg, hòa tan trong 100 ml nước vô trùng) 3 lần trước khi phân tích tiếp theo. Tất cả các thí nghiệm sau đây đã sử dụng tinh trùng được tinh chế từ 3 tình nguyện viên4 được chỉ định cho bốn nhóm và tất cả các thí nghiệm được thực hiện ít nhất trong ba lần lặp lại.

Đánh giá khả năng vận động của tinh trùng

Tinh trùng được tinh chế đã được nối lại trong dung dịch dinh dưỡng tinh trùng có độ pH 5,2, 6,2, 7,2 và 8.2 và được ủ trong 15, 30, 60, 90 và 120 phút tương ứng. Phân tích tinh dịch có sự trợ giúp của máy tính (CASA; WLJY-9000; Công ty TNHH Phát triển Công nghệ Thế kỷ mới Weili; Bắc Kinh; Trung Quốc) đã được sử dụng để đánh giá khả năng vận động của tinh trùng. Chuyển động không tiến triển (NP, tất cả các mô hình vận động khác không có tiến triển), vận động tiến triển (PR, tinh trùng di chuyển tích cực, theo tuyến tính hoặc trong một vòng tròn lớn, bất kể tốc độ), chuyển động (PR + NP), đường trung bình vận tốc (VAP, vận tốc trên một đường được làm nhẵn tính toán), vận tốc cong (VCL, vận tốc trên đường tinh trùng thực tế, bao gồm tất cả các sai lệch của chuyển động đầu tinh trùng), vận tốc đường thẳng (VSL,

Xét nghiệm HOS

Xét nghiệm HOS được sử dụng trong đánh giá khả năng sống của tinh trùng. Tinh trùng được nối lại trong dung dịch dinh dưỡng tinh trùng có độ pH lần lượt là 5,2, 6,2, 7,2 và 8.2 trong 60 phút và ly tâm ở mức 760 g trong 15 phút. Chất lỏng nổi trên bề mặt đã bị loại bỏ và kết tủa được trộn với 0,5 ml dung dịch trương nở (0,735 g natri citrat dihydrat và 1,351 g D-fructose hòa tan trong 100 ml nước tinh khiết) sau đó ủ trong 30 phút ở 37 ° C. Sau khi ủ, hơn 200 tinh trùng đã được CASA kiểm tra. Theo tiêu chí của Tổ chức Y tế Thế giới (2010), số lượng tinh trùng bị sưng và không sưng được ghi nhận tương ứng [ 28 ].

Xét nghiệm đo tinh trùng (SPM)

Các mao mạch chứa đầy dung dịch dinh dưỡng tinh trùng có pH khác nhau được đưa vào vuông góc vào ống nghiệm chứa 200 μL dịch tinh trùng (tinh trùng người được tinh chế trong dung dịch dinh dưỡng tinh trùng). Đầu của các pipet mao quản và mở các ống nghiệm đều được niêm phong bằng màng niêm phong, sau đó ủ trong 1 giờ ở 37 ° C. Theo tiêu chí của Tổ chức Y tế Thế giới (2010), khoảng cách di chuyển của tinh trùng được đo dưới kính hiển vi quang học (CX31; OLYMPUS; Nhật Bản).

Xét nghiệm Na + / K + -ATPase

Tinh trùng (10 7 ) được pha loãng với 2 ml dung dịch dinh dưỡng tinh trùng ở pH 5,2, 6,2, 7,2 và 8.2, tương ứng, trộn mạnh và ủ trong 60 phút ở 37 ° C trong tủ ấm 5% CO 2 . Các ống được ly tâm ở tốc độ 760 g trong 15 phút để loại bỏ dung dịch dinh dưỡng và kết tủa được rửa bằng dung dịch muối bình thường trong 3 lần và ly giải bằng siêu âm (4 ° C, 40% năng lượng, được siêu âm trong 5 giây, dừng lại 5 giây, chu kỳ 1 phút) (VCX750; Sonics; USA). Nồng độ protein được xác định bằng xét nghiệm axit bicinchoninic (BCA) (sản phẩm số 23225, Thermo, Hoa Kỳ). Hoạt tính Na + / K + -ATPase của tinh trùng được đo bằng Na + / K +Bộ dụng cụ đo -ATPase (Nam Kinh Jiancheng Bioengineering Inc.), và đơn vị được chứng minh là μmolPi / mg prot / giờ.

Xét nghiệm Ca 2+ nội bào

Mức độ Ca 2+ nội bào của tinh trùng được xác định bằng phương pháp tế bào học dòng chảy (FCM) và kính hiển vi quét đồng tiêu laser (LSCM).

Tinh trùng được ủ trong môi trường điện dung (dung dịch dinh dưỡng tinh trùng với albumin huyết thanh 10 mg / mL [BSA; sốA8806; Sigma; Hoa Kỳ]) [ 29 ], ở pH 5,2, 6,2, 7,2 và 8.2, tương ứng. Sau khi ủ 3,5 giờ ở 37 ° C trong tủ ấm 5% CO 2 , phần nổi 200 μL chứa tinh trùng có điện dung được lấy và điều chỉnh theo nồng độ tinh trùng 2 × 10 6 / mL. Những mẫu này được chuẩn bị cho xét nghiệm Ca 2+ nội bào .

Tóm lại, tinh trùng 200 μL trong dung dịch điện dung được ly tâm ở tốc độ 3.000 vòng / phút trong 5 phút; chất nổi trên bề mặt đã bị loại bỏ và tinh trùng được nối lại trong 300 0.01L 0,01 mol / L PBS (Ca 2+ và Mg 2+ plus). Các mẫu sau đó được ủ với 2 FlM Fluo3-AM (Công cụ thăm dò phân tử Inc.) trong 30 phút ở 37 ° C, được rửa bằng PBS và cuối cùng được gửi lại trong 1 mL PBS với Ca 2+ và Mg 2+ .

Mẫu tinh dịch lơ lửng được nhuộm bằng Fluo3-AM (0,8 mL) đã được FCM phân tích trên FACS Calibur (Becton Dickinson, Hoa Kỳ). Tổng cộng có 20.000 tế bào được đo cho mỗi mẫu và cường độ huỳnh quang của mỗi tinh trùng riêng lẻ đã thu được. Những thay đổi của Ca 2+ nội bào được biểu thị bằng huỳnh quang trung bình chia cho huỳnh quang nền. Dữ liệu thu được cuối cùng đã được phân tích bằng phần mềm Cell Quest (Phiên bản 3.2.1, Hệ thống miễn dịch tế bào miễn dịch Becton Dickinson, Thung lũng Silicon, CA).

LSCM (ZEISS LSCM510, Đức) cũng được sử dụng để đo cường độ huỳnh quang tương đối trong các ống sinh tinh riêng lẻ được thêm vào Fluo3-AM. Sự phát huỳnh quang được ghi lại ở bước sóng kích thích 488nm và bước sóng phát xạ 530nm. Chuỗi thời gian của các phần quang học của một ô được lấy bằng bước XY. Các phép đo huỳnh quang cho các trường nhìn khác nhau được thực hiện dưới mục tiêu 400 × và cường độ huỳnh quang trung bình của tất cả các tế bào tinh trùng trong một trường nhìn được sử dụng để biểu thị cường độ huỳnh quang của mẫu tinh dịch này.

Phân tích thống kê

Phần mềm SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago IL, USA) đã được sử dụng để đánh giá thống kê. Hồi quy tuyến tính được sử dụng để ước tính mối quan hệ giữa sự di chuyển của tinh trùng và tỷ lệ HOS. Các kết quả khác (độ linh động, PR, tốc độ HOS, SPM, Na + / K + -ATPase và nồng độ Ca 2+ nội bào ) được so sánh bằng phương pháp ANOVA một chiều và độ đồng nhất của phương sai đã được kiểm tra trước đó (với 0,1 là thử nghiệm tiêu chuẩn tiến hành kiểm tra Levene). Khi các phương sai bằng nhau được giả định, thử nghiệm LSD đã được chọn. Mặt khác, thử nghiệm T3 của Dunnett đã được thực hiện. Dữ liệu được biểu thị bằng phương tiện ± độ lệch chuẩn. Sự khác biệt được coi là có ý nghĩa thống kê khi p <0,05.

Các kết quả

Đánh giá sự di chuyển của tinh trùng sau khi điều trị bằng các giải pháp dinh dưỡng ở các độ pH khác nhau

Vì pH tinh dịch của con người nằm trong khoảng từ 5,2 đến 8,2 [ 30 ], tinh trùng người được tinh chế được ủ trong các dung dịch dinh dưỡng pH 5,2, 6,2, 7,2 và 8.2 trong 15, 30, 60, 90 và 120 phút, tương ứng đánh giá ảnh hưởng của pH đến sự di chuyển của tinh trùng. Như thể hiện trong hình 1A , tổng độ di động của tinh trùng chỉ giảm nhẹ trong toàn bộ thời gian ủ là 120 phút (pH 7,2: 59,86 ± 0,85%; pH 8.2: 56,52 ± 3,30%) trong các dung dịch dinh dưỡng pH 7,2 và 8,2. Ngược lại, môi trường axit (pH 5,2 và 6,2) làm giảm đáng kể tỷ lệ phần trăm của tổng số tinh trùng di động theo cách phụ thuộc vào thời gian. Hơn nữa, môi trường axit (pH 5,2 và 6,2) cũng làm giảm PR của tinh trùng ( Hình 1B ). Các thông số vận tốc (VSL, VCL và VAP) cũng được đánh giá (Hình 1C, 1D và 1E ). Các thông số vận tốc tương tự như PR của tinh trùng, tức là môi trường axit (pH 5,2 và 6,2) làm giảm VSL, VCL và VAP của tinh trùng

Khả năng sống của tinh trùng bị giảm trong môi trường axit

Để tìm hiểu xem khả năng tồn tại của tinh trùng có thay đổi trong quá trình ủ trong các dung dịch dinh dưỡng pH khác nhau trong 60 phút hay không, chúng tôi đã xác định tỷ lệ HOS của tinh trùng và kết quả cho thấy tỷ lệ HOS giảm đáng kể ở pH 5,2 (52,62 ± 0,02%, p <0,05 ) và các giải pháp dinh dưỡng 6,2 (62,35 ± 0,01%, p <0,05) so với pH 7,2 (83,43 ± 0,01%), nhưng không thay đổi ở pH 8.2 (82,00 ± 0,02%, Hình 2B ). Hơn nữa, mối quan hệ giữa tốc độ HOS và sự di chuyển của tinh trùng ở pH khác nhau được phân tích ở 60 phút. Một mối tương quan tích cực đã được tìm thấy cho tổng động lực của tinh trùng (r = 0,98, p <0,05, Hình 3A ). Điều tương tự cũng đúng với mối tương quan giữa tỷ lệ HOS và PR tinh trùng (r = 0,98, p <0,05, 

Chia sẻ:
Hỗ trợ trực tuyến
0931.772.338
  • Tư vấn nguồn nướcTư vấn nguồn nước
  • 0931 772 338
  • lamphuongquynh2014@gmail.com
  • Nhân viên hỗ trợNhân viên hỗ trợ
  • 01638219602
VIDEO CLIP
Sản phẩm bán chạy
CÔNG TY TNHH MTV LAM PHƯƠNG QUỲNH
CÔNG TY TNHH MTV LAM PHƯƠNG QUỲNH
CÔNG TY TNHH MTV LAM PHƯƠNG QUỲNH
Fanpage

Hệ thống chi nhánh

  • BẾN TRE

    BẾN TRE

    Ấp Thạnh Hòa B, Thị Trấn Thạnh Phú, Bến Tre

    Hotline: 0911983986 

  • Hồ Chí Minh

    Hồ Chí Minh

    220/101D Nguyễn Văn Khối, Phường 9 , Quận Gò Vấp

  •  Đà Nẵng

    Đà Nẵng

    160 Phạm Như Xương, Hòa Khánh Nam, Liên Chiểu, Tp.Đà Nẵng

  •  Thanh Hóa

    Thanh Hóa

    Địa chỉ: Trường Thọ, xã Tế Lợi, Nông Cống, Thanh Hóa

    Hotline: 0963.784.740

  •  Hải Phòng

    Hải Phòng

    166 Trần Nguyên Hãn, Lê Chân, Tp.Hải Phòng

  • Đồng Tháp

    Đồng Tháp

    763 Ấp Tân Hùng, Xã Tân Thuận Tây, TP Cao Lãnh, Đồng Tháp

  • Bình Dương

    Bình Dương

    Số 7 Đường N1, KDC TM Sóng Thần, KP THống Nhất, Dĩ An, Bình Dương

  • Hà Nội

    Hà Nội

    Địa chỉ 1: 304 Đường Xuân Định - Phường Xuân Đỉnh- H.Bắc Từ Liêm

    Địa chỉ 2: 252, Nguyễn Huy Tưởng, Thanh Xuân Trung, Thanh Xuân

Copyrights © 2018 CÔNG TY TNHH MTV LAM PHƯƠNG QUỲNH. All rights reserved.
  • Online: 4
  • Thống kê tháng: 9712
  • Tổng truy cập: 560736
Zalo